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Scientific Reports volume 13, Artigo número: 10342 (2023) Citar este artigo

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O vírus da peste suína africana (PSAV) é um patógeno animal letal que entra nas células hospedeiras por meio de endocitose. Até agora, os factores do hospedeiro especificamente necessários para a replicação do PSAV foram pouco identificados. Neste estudo, uma triagem de nocaute CRISPR/Cas9 em todo o genoma em células suínas indicou que os genes RFXANK, RFXAP, SLA-DMA, SLA-DMB e CIITA são importantes para a infecção produtiva por PSA. As proteínas codificadas por estes genes pertencem ao complexo principal de histocompatibilidade II (MHC II), ou complexo II de antígeno leucocitário suíno (SLA II). RFXAP e CIITA são fatores de transcrição específicos do MHC II, enquanto SLA-DMA/B são subunidades da molécula não clássica do MHC II SLA-DM. O nocaute direcionado de qualquer um desses genes levou a graves defeitos de replicação de diferentes isolados de PSA, refletidos pela eficiência de plaqueamento substancialmente reduzida, disseminação célula a célula, títulos de vírus de progênie e replicação de DNA viral. A reconstituição baseada em transgenes de SLA-DMA/B restaurou completamente a capacidade de replicação, demonstrando que o SLA-DM, que reside em endossomos tardios, desempenha um papel crucial durante as etapas iniciais da infecção por PSA.

O vírus da Peste Suína Africana (VPSA) é o agente causador da Peste Suína Africana (PSA), uma doença hemorrágica dos porcos domésticos e javalis (espécie Sus scrofa)1,2,3. O PSAV foi identificado pela primeira vez no Quénia em 1921 e tem sido notificado desde então na maioria dos países da África Subsariana4,5. Através do sequenciamento parcial do gene B646L, que codifica a principal proteína do capsídeo p72, foram especificados vinte e quatro genótipos de PSA6,7. Até agora, apenas dois deles, o genótipo I e o genótipo II, foram detectados fora de África, sendo o genótipo II responsável pela actual panzoótica. Desde a introdução do VPSA na Geórgia em 2007, foram notificados surtos de PSA em países da região europeia, da Federação Russa, da Ásia, da Oceânia e das Américas3,8,9 (site da OIE-Wahis, visitado em novembro de 2022). Na maioria dos países afectados, o controlo da PSA ainda está limitado a medidas de gestão de riscos biológicos, abordagens de vigilância e estratégias de resposta, que incluem o abate e restrições comerciais, e resultam em perdas económicas e de produção significativas, uma vez que as vacinas licenciadas não estão actualmente disponíveis comercialmente3.

ASFV is the only member of the genus Asfivirus of the family Asfarviridae10,11,12, (2020)." href="/articles/s41598-023-36788-9#ref-CR13" id="ref-link-section-d8432881e574"> 13. Seu genoma linear de DNA de fita dupla varia entre 170 e 193 kpb em tamanho e contém 150 a 167 quadros de leitura aberta que codificam proteínas previstas14,15,16. A existência de 134 proteínas virais foi confirmada, mas para muitas delas as funções ainda são desconhecidas, ou só poderiam ser previstas com base em homologias de sequências17,18,19,20,21. As partículas de PSA contêm aproximadamente 82 proteínas virais, têm cerca de 250 nm de tamanho e são multicamadas. Eles compreendem uma membrana lipídica externa, um capsídeo externo icosaédrico, uma membrana lipídica interna, um capsídeo interno, um núcleo proteico espesso e um nucleóide contendo o genoma .

As partículas de PSA entram na célula hospedeira através de endocitose mediada por dinamina e clatrina24,25 ou através de macropinocitose26,27. Uma vez internalizadas, as partículas do VPSA trafegam por toda a via endolisossomal. Diretamente após a infecção eles podem ser detectados em endossomos precoces ou macropinossomos por microscopia eletrônica e por colocalização de proteínas virais com marcadores endossomais específicos (EEA1 e Rab5)26. Em momentos posteriores, o PSAV é encontrado em endossomos tardios ou lisossomos colocalizados com CD63, Rab7, Lamp1 e catepsina . Durante este transporte, as partículas de PSA sofrem extensas alterações estruturais que resultam em viriões sem membranas externas e cápsides exteriores dentro de endossomas tardios multivesiculares. O envelope interno exposto das partículas do VPSA funde-se então com a membrana endossomal, resultando na liberação de partículas centrais nuas no citoplasma26. Após uma etapa de iniciação curta e pouco compreendida dentro do núcleo, a replicação do DNA viral e a morfogênese das partículas virais ocorrem dentro do citoplasma nas fábricas de vírus perinucleares adjacentes ao centro organizador dos microtúbulos . Para a formação de partículas virais descendentes, são adquiridas membranas derivadas do retículo endoplasmático (RE) e são montados vírions intracelulares que consistem no genoma contendo núcleo interno, capsídeo interno, envelope interno e capsídeo externo30,31,32,33. Esses vírions intracelulares são então transportados ao longo dos microtúbulos até a periferia celular e adquirem sua membrana lipídica externa por brotamento da membrana plasmática . Tanto os vírions intracelulares quanto os vírions com duplo envoltório são infecciosos32.