Microambiente tumoral líquido aumenta via de sinalização WNT de metástase peritoneal de câncer gástrico

Scientific Reports volume 13, Artigo número: 11125 (2023) Citar este artigo

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O câncer gástrico continua sendo um dos tumores mais prevalentes em todo o mundo e a metástase peritoneal é responsável por aproximadamente 60% da morte em pacientes com câncer gástrico avançado. No entanto, o mecanismo subjacente da metástase peritoneal é pouco compreendido. Estabelecemos organoides derivados de ascite maligna (MA) de pacientes com câncer gástrico e notamos que o sobrenadante de MA poderia aumentar fortemente a formação de colônias de organoides. Assim, percebemos que a interação entre células cancerígenas esfoliadas (CECs) e o microambiente tumoral líquido contribui para a metástase peritoneal. Além disso, projetamos um teste de controle de componentes médios que provou que os exossomos derivados de MA não poderiam aumentar o crescimento de organoides. Utilizando imunofluorescência e imagem confocal, bem como ensaio repórter de luciferase dupla, nossos dados mostraram que a via de sinalização WNT foi regulada positivamente por altas concentrações de ligantes WNT (wnt3a e wnt5a), o que foi verificado por ELISA. Além disso, a supressão da via de sinalização WNT diminuiu a função promotora de crescimento do sobrenadante de MA. Este resultado implicou a via de sinalização WNT como um potencial alvo terapêutico para metástases peritoneais de câncer gástrico.

A metástase é a principal causa de morte em pacientes com câncer. Particularmente, a metástase peritoneal é responsável por aproximadamente 60% da morte em pacientes com câncer gástrico avançado1. Ascite maligna (MA), como um dos sintomas mais comuns em pacientes com câncer gástrico avançado, prediz prognóstico adverso.

A ocorrência de metástase de implantação envolve a disseminação de CECs e formação de nicho pré-metastático. A transição mesotelial-mesenquimal (MMT) é considerada a chave para uma série de alterações patológicas2.

MA é um microambiente tumoral hipóxico, inflamatório e imunossupressor, composto por citocinas quimiocinas complexas, fatores de crescimento, exossomos e várias células em suspensão, como células mesoteliais tumorais e células imunológicas. No entanto, a interação entre CECs e o microambiente tumoral, como evitar anoikis, ainda é pouco compreendida.

Até agora, linhas organoides derivadas de vários tipos de tumores foram estabelecidas e provaram alta consistência na herança biológica3. Uma série de pesquisas destinadas a verificar a viabilidade de que organoides são empregados para triagem individualizada de medicamentos, hospedados um após o outro no início do piloto4,5,6. A importância do microambiente tumoral na gênese e progressão do tumor está sendo reconhecida à medida que a pesquisa avança. O estroma tumoral, incluindo células imunes, foi trazido para o sistema de cultura organoide para imitar o microambiente tumoral .

Organoides modelando unidades gástricas normais e câncer gástrico já foram relatados anteriormente9. Usando um protocolo semelhante, estabelecemos organoides derivados de MA de pacientes com câncer gástrico e notamos que o sobrenadante de MA poderia aumentar fortemente a formação de colônias de organoides malignos derivados de ascite (MADO) . Consideramos a heterogeneidade entre o câncer gástrico primário e as CECs, bem como seus microambientes discrepantes, que fazem com que esse fenômeno ocorra. Na verdade, a diversidade do espectro de mutação entre tumores primários e CEC no MA já foi relatada anteriormente11.

Portanto, pretendemos determinar como o microambiente MA melhora os comportamentos biológicos malignos das CECs. Aqui mostramos que existem altos níveis de ligantes WNT (wnt3a e wnt5a) no sobrenadante da ascite, o que regulou positivamente a via de sinalização WNT.

MA foi coletado de pacientes com câncer gástrico submetidos a paracentese paliativa. Todos esses casos foram confirmados patologicamente como adenocarcinoma gástrico por cirurgia ou biópsia endoscópica, e suas ascites foram confirmadas como contendo células tumorais por citologia de camada fina em base líquida. Todos os pacientes envolvidos assinaram um consentimento informado. Todas as coletas e experimentos de tecidos foram conduzidos em estrita conformidade com as diretrizes da Declaração de Helsinque (2013) e foram aprovados pelo comitê de ética local (Comitê de Ética em Medicina, Navy Medical University, PLA). Os documentos de ética específicos podem ser encontrados eletronicamente na seção Arquivos Relacionados deste artigo.